特殊石蠟切片中性脂質(zhì)尼羅紅直接染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

主要用途

特殊石蠟切片中性脂質(zhì)尼羅紅直接染色試劑是一種旨在使用特殊脫蠟處理和高度脂溶性惡嗪類(lèi)熒光染料尼羅紅染色技術(shù)，特異性地使組織細(xì)胞內(nèi)中性脂質(zhì)顯示金黃色熒光，分析石蠟包埋組織切片中（保留）的中性甘油三脂、脂質(zhì)以及脂蛋白等脂質(zhì)狀況的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良傳統(tǒng)方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種人體和動(dòng)物組織石蠟切片的脂質(zhì)檢測(cè)。用于成脂細(xì)胞定性、細(xì)胞病理學(xué)分析（脂質(zhì)細(xì)胞瘤；LIPOID）和識(shí)別（脂肪肉瘤；liposarcoma）等研究。產(chǎn)品即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰。

技術(shù)背景

脂類(lèi)物質(zhì)（LIPIDS）是一類(lèi)脂溶性（疏水性）的自然分子，分為簡(jiǎn)單脂質(zhì)包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂；復(fù)合脂質(zhì)包括磷脂、糖脂、硫脂以及脂蛋白；和中性脂質(zhì)包括甘油、固醇類(lèi)（STEROL）物質(zhì)，例如膽固醇。脂類(lèi)物質(zhì)在機(jī)體中具有能量?jī)?chǔ)存的作用，是膜結(jié)構(gòu)的組成成分和細(xì)胞信號(hào)分子。細(xì)胞漿脂滴（lipid droplet）的形成是正常細(xì)胞生理過(guò)程。脂滴由中性脂質(zhì)構(gòu)成，通常為甘油三酯，作為脂肪酸能量?jī)?chǔ)備；或膽固醇酯（cholesteryl ester），作為過(guò)多細(xì)胞膽固醇的存儲(chǔ)。尼羅紅染色劑（9-diethylamino-5H-benzo[alpha]-phenoxazine-5-one；Nile red）是一種親脂性的惡嗪類(lèi)熒光染料。與中性脂類(lèi)物質(zhì)結(jié)合后，在特定激發(fā)波長(zhǎng)480nm的激發(fā)下，顯示強(qiáng)金黃色熒光（散發(fā)波長(zhǎng)528nm）。 其分子式為C20H18N2O2，分子量為318。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過(guò)程中，有機(jī)溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質(zhì)成分，因此使用非二甲苯類(lèi)脫蠟，以保護(hù)組織中的脂質(zhì)成分是尼羅紅染色的關(guān)鍵。

產(chǎn)品內(nèi)容

脫蠟液（Reagent A）                 50毫升

凈化液（Reagent B）            10毫升

清理液（Reagent C）            50毫升

染色液（Reagent D）           100微升

稀釋液（Reagent E）            10毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)              1份

保存方式

保存染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于反應(yīng)液配制的容器

恒溫培養(yǎng)箱：用于組織處理孵育

熒光顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

一、 脫蠟處理

1． 取出待測(cè)的6微米厚的石蠟包埋的組織切片

2． 放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘

3． 室溫下靜置15分鐘

4． 小心加上500微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

5． 室溫下孵育5分鐘

6． 小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）

7． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至6一次

8． 小心加上200微升凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

9． 室溫下孵育5分鐘

10． 小心移去切片上的凈化液（Reagent B）

11． 小心加上200微升清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

12． 室溫下孵育3分鐘

13． 小心移去切片上的清理液（Reagent C）

二、 樣本染色處理

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒里的染色液（Reagent D）凍融，然后移出1毫升稀釋液（Reagent E）到1.5毫升離心管，加入10微升染色液（Reagent D），混勻后，置入冰槽里，標(biāo)記為染色工作液，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

1． 小心加上200微升染色工作液，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

2． 室溫下孵育10分鐘，避免光照

3． 放上蓋玻片

4． 即刻在熒光顯微鏡下觀察：激發(fā)波長(zhǎng)488nm，散發(fā)波長(zhǎng)528nm（中性脂類(lèi)物質(zhì)呈現(xiàn)金黃色）

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為50次操作

2． 建議用戶避免使用常規(guī)石蠟包埋組織切片，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理

3． 操作時(shí)，須戴手套

4． 染色工作液新鮮配制，即刻使用，不宜保存

5． 染色液（Reagent C）的工作液使用比例：1毫升體系可以使用10微升（1：100容量比）

6． 染色時(shí)更換試劑溶液時(shí)，保持切片面基本晾干

7． 試劑溶液在切片表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿切片表面

8． 整個(gè)染色操作，在避光狀態(tài)下進(jìn)行

9． 染色完成后，即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察

10． 本公司提供系列脂類(lèi)染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰