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過氧化物酶(POD)測試盒說明書
點擊次數(shù)：213 更新時間：2024-11-21
 

一、測定原理：上海哈靈生物科技有限公司生產(chǎn)的過氧化物酶(POD)測試盒利用過氧化物酶(POD)催化過氧化氫反應(yīng)的原理，通過測定420nm處吸光度的變化得出其酶活性。

二、試劑的組成和配制：（試劑盒有效期6個月）

  • 試劑一：60mL液體×4瓶，4℃保存。

  • 試劑二：粉劑×3瓶，4℃保存。

    • 試劑二應(yīng)用液的配制：臨用每瓶粉劑加入10mL的雙蒸水溶解，4℃避光保存。（顏色變深以后棄用）

  • 試劑三：5mL液體×1瓶，4℃保存。

    • 試劑三應(yīng)用液的配制：臨用前用蒸餾水15～30倍稀釋，使得在1cm光徑、波長240nm下，蒸餾水調(diào)零時，試劑三應(yīng)用液的吸光值保持在0.4左右，現(xiàn)用現(xiàn)配。若吸光值太高，則加蒸餾水稀釋；若吸光值太低，則加入適量試劑三。（一般在25倍左右稀釋）

  • 試劑四：50mL液體×2瓶，4℃保存。

三、所需儀器及試劑：上海哈靈生物科技有限公司推薦使用可調(diào)420nm波長的可見光分光光度計及1cm石英光徑比色皿，以及可調(diào)240nm波長的紫外光分光光度計，渦旋混合器，離心機，37℃水浴鍋，秒表，蒸餾水，生理鹽水等儀器和試劑。

四、操作步驟：

  1. 前處理：

    • 植物組織勻漿的制備：準確稱取植物組織重量，按照重量（g）:體積(mL)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)（推薦使用生理鹽水(0.86%或0.9%的NaCl水溶液)或磷酸鹽緩沖液︰0.1mol /L pH7～7.4），冰水浴條件下制備成10％的組織勻漿液，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后，取上清液進行測定。

  2. 操作表：

    • 測定管 對照管

    • 試劑一 (mL) 2.4 2.4

    • 試劑二應(yīng)用液(mL) 0.3 0.3

    • 試劑三應(yīng)用液(mL) 0.2

    • 雙蒸水(mL) 0.2

    • 樣本(mL) 0.1 0.1

    • 37℃水浴準確反應(yīng)30分鐘

    • 試劑四(mL) 1.0 1.0

    • 混勻后，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清于420nm處，1cm光徑，雙蒸水調(diào)零，測定OD