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細(xì)胞分離試劑盒的挑選
點(diǎn)擊次數(shù):1322 更新時(shí)間:2013-07-25
 

 怎么挑選適宜的細(xì)胞分離試劑盒

    細(xì)胞分離試劑盒的作業(yè)原理主要有兩種——正向挑選和負(fù)向挑選。正向挑選的試劑盒,運(yùn)用與目標(biāo)細(xì)胞直接的抗體這種方法來進(jìn)行捕獲。通常情況下,這種抗體與磁珠相連,就可以使用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-細(xì)胞復(fù)合物提取出來,再經(jīng)過二抗將磁珠與目標(biāo)細(xì)胞分隔。這種方法就是正向挑選。負(fù)向挑選的試劑盒也選用相似的抗體包被磁珠,不過這種試劑盒是通過去掉樣品中的非目的細(xì)胞來直接捕獲目的細(xì)胞。


    從樣品中分離提純同種細(xì)胞,是許多低端運(yùn)用的重要一步,分離得到的細(xì)胞能夠用于蛋白分離、生化剖析、?細(xì)胞計(jì)數(shù)、?基因判定、細(xì)胞計(jì)數(shù)、生化剖析、等研討。一款適宜的細(xì)胞分離試劑盒能夠說是試驗(yàn)成功的保證,由于只要取得正確的細(xì)胞,作用于結(jié)果的的剖析成果才能夠。當(dāng)前,市場上有多種多樣的分離試劑盒可供挑選,它們的首要差異在于分離辦法和挑選象征。
這兩種細(xì)胞分離試劑盒怎么取舍,首要取決于目標(biāo)細(xì)胞的外表是不是具有特異性強(qiáng)的挑選象征。這樣的挑選象征能夠完成特異性的捕獲,防止所取得的細(xì)胞被非目標(biāo)細(xì)胞污染。若是你的目標(biāo)細(xì)胞剛好具有這樣的挑選象征,那么正向挑選的細(xì)胞分離試劑盒即是佳挑選。但若是目標(biāo)細(xì)胞并不具有特異性強(qiáng)的挑選象征,那咱們佳仍是選用負(fù)向挑選的細(xì)胞分離試劑盒。
挑選象征的斷定
PubMed and other databases through literature, we are usually able to determine the expression of the target cells selected symbol. If no suitable literature since the appearance of a symbol, we can also use the target cell's DNA sequence BLAST search.BLAST查找成果會顯現(xiàn),目標(biāo)細(xì)胞上能夠表達(dá)的外表象征,在此基礎(chǔ)上能夠選擇用于捕獲的細(xì)胞外表蛋白。舉例來說,對一個(gè)T細(xì)胞進(jìn)行BLAST查找,成果會顯現(xiàn)該細(xì)胞是不是表達(dá)CD4CD8。在得知目標(biāo)細(xì)胞表達(dá)CD4之后,咱們能夠先對樣品進(jìn)行一個(gè)免疫試驗(yàn)(如ELISA),以查驗(yàn)BLAST查找的成果。一旦證明目標(biāo)細(xì)胞確實(shí)表達(dá)CD4,咱們就能夠用相應(yīng)試劑盒來挑選CD4陽性的T細(xì)胞。
通常流程


    一個(gè)用于分離CD4陽性T細(xì)胞的試劑盒,它的操作流程有以下幾步。首先,將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠一同孵育,使抗體與CD4+ T細(xì)胞。然后洗去不需要的非目標(biāo)細(xì)胞(即不表達(dá)CD4的細(xì)胞),留下磁珠-抗體-細(xì)胞復(fù)合物。將以上復(fù)合物與能anti-CD4抗體的二抗一同孵育,二抗就會代替CD4+T細(xì)胞,構(gòu)成磁珠-抗體-二抗復(fù)合物。咱們能夠用磁鐵去掉這種磁珠-抗體-二抗復(fù)合物,而一切的CD4+細(xì)胞留在上清中。終,就能完成實(shí)驗(yàn)了。