DMEM培養(yǎng)基配置的方法以及注意事項(xiàng) |
點(diǎn)擊次數(shù):4859 更新時(shí)間:2013-09-18 |
配制DMEM培養(yǎng)基過(guò)濾前和過(guò)濾后的NaHCO3,雙抗體可以添加,也可以不加,能加入漿液過(guò)濾,在好的或,見細(xì)胞和血清濃度,不同,不同的細(xì)胞需要的同時(shí),凍存細(xì)胞需要培養(yǎng)基血清含量較高,一般為20%-30%。此外,包裝后的培養(yǎng)基和血清過(guò)濾,除了被用于一瓶,其他存儲(chǔ)在-20度,或一部分,如谷氨酰胺易降解。
配制DMEM培養(yǎng)基可以先用后的體積是2/3的水溶解配制,包裝袋也需要清洗。2G*溶解的碳酸氫鈉此外,加雙抗后,定容至終體積。過(guò)濾到零下20攝氏度保存。添加血清的時(shí)候。
根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn),配制DMEM培養(yǎng)基正常血清沒(méi)有過(guò)濾,雙抗體不需要過(guò)濾,可添加在前面(如果需要的話,除非雙反)培養(yǎng)基的罕見的內(nèi)容,否則就不需要在零下20攝氏度保存,培養(yǎng)兩周跑出去不在4存儲(chǔ)任何問(wèn)題。另外,我不同意與冷凍細(xì)胞明顯高于血清,沒(méi)有根據(jù)。在ATCC細(xì)胞凍存的描述看,我很少使用血清,一般10%二甲基亞砜+90%和冷凍液配方血清中是常用的。凍存存活率*的細(xì)胞。(當(dāng)然,冷凍也是非常重要的存儲(chǔ)過(guò)程)
配制DMEM培養(yǎng)基時(shí)血清不必要過(guò)濾,但我認(rèn)為雙反應(yīng)進(jìn)行過(guò)濾,畢竟,是不是很麻煩。同時(shí)對(duì)細(xì)胞冷凍血清添加量存在著一定的問(wèn)題,重要的是冷凍程序,如離心速度不太大,有二甲基亞砜的量不能超過(guò)10%,這是非常重要的。
配制DMEM培養(yǎng)基除了DMEM粉末直接加入,也應(yīng)按照說(shuō)明書添加碳酸氫鈉適量,它是關(guān)于2G,pH值可能遠(yuǎn)大于你所需要的pH值,再加入適量HEPES,約2.38g,pH滿意度,根據(jù)需要添加雙抗,過(guò)濾,分裝。如果數(shù)量不多,儲(chǔ)存超過(guò)20度,必要時(shí)添加血清,血清是不需要消毒,因?yàn)楹细裱逡堰_(dá)到無(wú)菌的條件下,搖它 |
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