哈靈教你操作培養(yǎng)基實驗的技巧 |
點擊次數(shù):1013 更新時間:2015-02-12 |
*、添加劑的添加 1.溫度的掌握:卵黃和抗生素類添加的溫度都不應(yīng)太高。 2.定量:過多會抑制一些目標(biāo)菌,太少又導(dǎo)致雜菌的過度生長。 第二、培養(yǎng)溫度的掌握: 1.真菌類:25-28℃培養(yǎng) 2.細菌類:李氏菌在增菌和生化中要求培養(yǎng)溫度在30℃左右。 3.其他一般在36℃左右 第三、接種方法:常用的方法主要有劃線、三點接種、穿刺接種、傾注接種、涂布接種、液體接種。 第四、革蘭氏染色方法:染色時間的掌握、沖洗的方法。 第五、劃線獲得單個菌落的方法。劃不出單個菌落的原因: 1.平板上有過多的水分; 2.劃線時接種環(huán)未經(jīng)反復(fù)灼燒。 3.多區(qū)劃線,三區(qū)或四區(qū)劃線。 第六、涂布和傾注的區(qū)別: 1.涂布利于觀察,但由于涂布棒上會帶有少量的菌液,影響計數(shù)的準(zhǔn)確性。 2.涂布更為準(zhǔn)確,但不利于觀察菌落的狀態(tài)。 第七、培養(yǎng)基配制時應(yīng)注意的問題: 1.滅菌溫度要嚴格控制,按照要求滅菌,尤其含糖量較高的培養(yǎng)基溫度不應(yīng)太高,過高會導(dǎo)致糖分焦化,影響質(zhì)量。 2.瓊脂培養(yǎng)基不能反復(fù)溶化。反復(fù)溶化會破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。 3.培養(yǎng)基不能反復(fù)滅菌,反復(fù)滅菌也會導(dǎo)致營養(yǎng)成分的破壞。 4.含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌后,要搖勻。 第八、板的保存:大多數(shù)平板如VRBA、DC、尿素酶生化管、顯色系列等要避光低溫保存。 第九、觀察時間的掌握 按SN、GB等標(biāo)準(zhǔn)或培養(yǎng)基的使用說明所述時間進行觀察,時間過短或時間過長,單菌落的特征都不會很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基,時間短單菌落看不到卵磷脂環(huán),時間長綿羊李氏菌也會產(chǎn)生沉淀環(huán)。OXA、PALCAM的觀察也如此,時間過長,李氏菌使整個平板成黑色,不利于觀察單個菌落。 第十、生化實驗 1.接種的方法; 2.氧化型和發(fā)酵型實驗操作; 3.陽性菌種的對照; 4.接種前的純化。挑取單個菌落進行一系列的生化。 第十一、關(guān)于殺菌的幾個概念 1.抑制:是在亞抑制劑量因子作用下導(dǎo)致微生物生長停止,但在移去這些因子后生長仍可以恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。 2.死亡:在致死劑量因子的作用下或在亞致死劑量因子長時間的作用下,導(dǎo)致微生物生長能力不可逆喪失,即使移去這種因子后生長仍不能恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。 3.防腐:在某些化學(xué)物質(zhì)或物理因子作用下,能防止或抑制微生物生長的一種措施,它能防止食物腐敗或防止食物霉變。 4.消毒:利用某種方法殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有病原微生物的一種措施,它可以起到防止感染和傳播的作用。 5.滅菌:利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內(nèi)的所有病原微生物的一種措施。 6.化療:利用具有選擇毒性的化學(xué)物質(zhì),例磺胺、抗生素等對生物體內(nèi)部被微生物感染的組織或病變細胞進行治療,以殺死組織內(nèi)的病原微生物或病變細胞,但對有機體無毒害作用的治療措施。 第十二、產(chǎn)品的保存: 1.干粉培養(yǎng)基:避光干燥,結(jié)塊后不能使用。 2.亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等:冷凍保存,使用時,要常溫解凍,避免水浴加熱。 3.抗生素類:冷藏保存,溫度過高會導(dǎo)致靈敏度的下降。 4.兔血漿:冷藏保存少量的紅色不會影響結(jié)果。 |
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