目的：研究使用此試劑本試劑盒測(cè)定大鼠血清，血漿， 基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）含量的上清液樣品。 實(shí)驗(yàn)原理： 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶檢測(cè)樣品，本試劑盒的雙抗體夾心法（MMP-2）水平的2。與純 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，單克隆抗體的多孔涂層 基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2），然后加入MMP-2抗體、HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成 抗體復(fù)合物酶與底物TMB顯色，*清洗后。TMB HRP催化酶轉(zhuǎn)化 在酸的作用下進(jìn)入決賽的黃色?；|(zhì)金屬蛋白酶的顏色深度和樣品中的2（MMP 正相關(guān)。測(cè)得的吸光度在450nm波長(zhǎng)與ELISA（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品 基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）濃度。 試劑盒組成： 試劑盒組成48孔配置96孔配置保 說(shuō)明書1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1個(gè)1個(gè) 酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保 標(biāo)準(zhǔn)品：450μg/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保 酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保 樣本處理及要求： 1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收 清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。 2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后， 20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該 離心。 3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存 中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。 4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-30 分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液， 濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20 鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?/div> 用。標(biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器 將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待 檢測(cè)，其余冷凍備用。 6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上 進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融. 7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟： 1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo) 準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二 孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl， 混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各 取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混 勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn) 品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl， 濃度分別為300μg/L，200μg/L，100μg/L，50μg/L，25μg/L）。 2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣 品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣 品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混 勻。 3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。 5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此 重復(fù)5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 7.溫育：操作同3。 8.洗滌：操作同5。 9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15分鐘. 10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止 液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 注意事項(xiàng)： 1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間 控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物請(qǐng)避光保存。 7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 10.如與英文說(shuō)明書有異，以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。 計(jì)算： 標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)， 在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)OD樣品 從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度值乘以稀釋； 多；或與標(biāo)準(zhǔn)濃度與標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程，樣本的OD值 方程，計(jì)算樣品濃度，再乘以稀釋 多，為樣品的實(shí)際濃度 （此圖僅供參考） 試劑盒性能： 1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。 2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11% 檢測(cè)范圍： 20μg/L-400μg/L 保存條件及有效期： 1.試劑盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6個(gè)月 |
ELISA（酶免）試劑盒
人ELISA試劑盒
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