本頁(yè)描述的產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不用于臨床，非醫(yī)療器械，不做其他用途。

產(chǎn)品編號(hào)：10387.1

名稱：活體細(xì)胞溶酶體膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙熒光檢測(cè)試劑盒    

規(guī)格：20次

價(jià)格：客服

活體細(xì)胞溶酶體膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙熒光檢測(cè)試劑盒保存方式：

保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

24孔細(xì)胞培養(yǎng)板：用于貼壁細(xì)胞染色的容器
1.5毫升離心管：用于細(xì)胞染色的容器
微型臺(tái)式離心機(jī)：用于沉淀細(xì)胞
培養(yǎng)箱：用于染色孵育

（共聚焦）熒光顯微鏡：用于細(xì)胞熒光分析
熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于細(xì)胞熒光定量分析
細(xì)胞流式儀：用于細(xì)胞熒光分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 貼壁細(xì)胞染色
• 準(zhǔn)備1個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)24孔板的待測(cè)細(xì)胞（注意：可以使用載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和其它培養(yǎng)孔板，見(jiàn)注意事項(xiàng)8）
• 小心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液
• 小心沿著孔壁加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液（Reagent A）到1個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)孔，覆蓋培養(yǎng)孔表面
• 小心抽去清理液
• 小心沿著孔壁加入xx微升染色液（Reagent B）到1個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)孔，覆蓋培養(yǎng)孔表面
• 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育15分鐘，避免光照
• 小心抽去染色液（Reagent B）
• 小心沿著孔壁加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液（Reagent A）到細(xì)胞培養(yǎng)孔
• 小心抽去清理液
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟8和9一次
• 小心沿著孔壁加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液（Reagent A）到細(xì)胞培養(yǎng)孔
• 選擇下列方式之一進(jìn)行操作：

（A）使用倒置熒光顯微鏡觀察（定性檢測(cè)）：

激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)528nm――綠色熒光增強(qiáng)，表明膜通透性（LMP）增強(qiáng)

激發(fā)波長(zhǎng)555nm，散發(fā)波長(zhǎng)617nm――紅色熒光減弱，表明膜通透性（LMP）增強(qiáng)

• 使用熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)（定量檢測(cè)）：

激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)528nm――RFU升高，表明膜通透性（LMP）增強(qiáng)

激發(fā)波長(zhǎng)555nm，散發(fā)波長(zhǎng)617nm――RFU降低，表明膜通透性（LMP）增強(qiáng)

二、懸浮細(xì)胞或脫離細(xì)胞染色

1．將懸浮細(xì)胞或脫離細(xì)胞（1 X 106細(xì)胞）移入到1.5毫升離心管
2．放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
3．小心抽去上清液
4．加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
5．放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6．小心抽去上清液
7．加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
8．加入xx微升含有染色液（Reagent B），充分混勻 
9．放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育15分鐘，避免光照
10．放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
11．小心抽去上清液
12．加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
13．放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
14．小心抽去上清液
15．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟12至14一次
16．加入xx微升37℃預(yù)熱的清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
17．選擇下列方式之一進(jìn)行操作：
a)進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析：FL1（激發(fā)波長(zhǎng)488nm，散發(fā)波長(zhǎng)528nm），或FL3（激發(fā)波長(zhǎng)555nm，散發(fā)波長(zhǎng)617nm）觀察10000個(gè)細(xì)胞以上――
FL1：波峰右移，表明膜通透性（LMP）增強(qiáng)
FL3：波峰左移，表明膜通透性（LMP）增強(qiáng)

b)或使用（共聚焦）熒光顯微鏡觀察（定性檢測(cè)）：
1）移取10微升上述細(xì)胞懸液到載波片上，蓋上蓋玻片 
激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)528nm――綠色熒光增強(qiáng)，表明膜通透性（LMP）增強(qiáng)
激發(fā)波長(zhǎng)555nm，散發(fā)波長(zhǎng)617nm――紅色熒光減弱，表明膜通透性（LMP）增強(qiáng)

c)或使用熒光分光光度儀檢測(cè)（定量檢測(cè)）：
1）移取500微升上述細(xì)胞懸液到1毫升比色杯
2）加入xx微升清理液（Reagent A）
3）上下傾倒混勻數(shù)次
4）放進(jìn)熒光分光光度儀：
激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)528nm――RFU升高，表明膜通透性（LMP）增強(qiáng)
激發(fā)波長(zhǎng)555nm，散發(fā)波長(zhǎng)617nm――RFU降低，表明膜通透性（LMP）增強(qiáng)

注意事項(xiàng)

1．本產(chǎn)品為20次（0.5毫升體系/次）操作
2．操作時(shí)，須戴手套
3．操作時(shí)，避免污染母液
4．建議細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行熒光檢測(cè)分析 
5．孵育時(shí)，必須避免光照
6．本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)

調(diào)整處理液：

操作容器    建議操作體系
載玻片    100微升
載玻片培養(yǎng)皿    1毫升
35mm培養(yǎng)皿    1毫升
96孔培養(yǎng)板    100微升
48孔培養(yǎng)板    200微升
24孔培養(yǎng)板    500微升
12孔培養(yǎng)板    1毫升
6孔培養(yǎng)板    2毫升
25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶    3毫升

7．可以使用綠色熒光中激發(fā)波長(zhǎng)490nm±20，散發(fā)波長(zhǎng)528±38；紅色熒光中激發(fā)波長(zhǎng)555±28，散發(fā)波長(zhǎng)617±50
8．用戶可以持續(xù)讀數(shù)5分鐘，觀察熒光讀數(shù)的增強(qiáng)或減低，以表明熒光染料的移位變化  
9．本公司提供系列溶酶體分析試劑產(chǎn)品